کاریوتیپ موش رت
ساعت ٢:٥۱ ‎ب.ظ روز ۱۳۸٩/٥/٦  کلمات کلیدی: karyotype ، rat ، کاریوتیپ

 

دستور العمل تهیه کاریوتیپ موش رت  (Rat karyotyping)

 



 

1.       به ازای هر گرم وزن بدن جانور 2 سی‌سی محلول مخمر آبجو در زیر پوست (ناحیه پشت) تزریق گردد.

2.       12 الی 24 ساعت بعد کلشی‌سین زیر پوست شکم تزریق گردد (1 سی‌سی به ازای هر گرم وزن بدن جانور).

3.       جانور را به مدت 45 تا 60 دقیقه به حال خود می‌گذاریم.

4.       در طی این مدت، 8 سی‌سی محلول هیپوتونیک KCl در درون بوته چینی در آون 37 درجه سلسیوس می‌‌گذاریم.

5.       استخوان ران نمونه را از گوشت تمیز کرده، دو سر آنرا قیچی می‌کنیم و استخوان را در بوته چینی حاوی محلول KCl قرار می‌دهیم.

6.       به کمک سرنگ و سوزن، محلول KCl را درون استخوان تزریق می‌کنیم تا محتویات آن در محلول KCl وارد شود و سپس به کمک انبر، استخوان را از بوته خارج کرده و اوت میکنیم.

7.       بوته چینی حاوی مغز استخوان را به مدت 15 دقیقه در آون 37 درجه سلسیوس قرار می‌دهیم.

8.       محلول  داخل بوته چینی را به لوله سانتریفوژ منتقل نموده و به آن 5/1 الی 2 سی‌سی فیکساتور اضافه می‌کنیم و با پیپت پاستور هم می‌زنیم و سپس آنرا به مدت 20 دقیقه ئر هوای آزاد انکوبه می‌کنیم.

9.       محلول را بمدت 10 دقیقه  و با دور 1000 سانتریفوژ می‌کنیم.

  1. مایع رویی را دور ریخته و سپس به رسوب حاصل، 5 سی‌سی محلول فیکساتور اضافه نموده و با پیپت پاستور هم می‌زنیم و سپس محلول را بمدت 10 دقیقه  و با دور 1000 سانتریفوژ می‌کنیم.
  2. تکرار مرحله فبل.
  3. مایع رویی را دور ریخته و سپس به رسوب حاصل، 1 سی‌سی محلول فیکساتور اضافه نموده و با پیپت پاستور هم می‌زنیم.
  4. لامهایی را که قبلا با پتاس تمیز شده و در داخل فریزر 20- درجه سلسیوس قرار داشت را آماده می‌کنیم و بصورت مورب بر روی میز و به جایی تکیه می‌دهیم.
  5.  محلول درون لوله سانتریقفوژ را با پیپت پاستور کشیده و از ارتفاع 30 تا 50 سانتی‌متری بر روی لامهایی که بصورت مورب قرار گرفته‌اند، می‌چکانیم.
  6. لامها را توسط شعله خشک نموده و روی لامها را با محلول گیمسای 4%  و به مدت 15 الی 20 دقیقه می‌پوشانیم.
  7. لامها را توسط آب مقطر(فاقد یون منیزیم وکلسیم) شستشو داده و سپس در هوای آزاد خشک می‌کنیم.

 

لامها آماده بررسی با میکروسکپ نوری جهت مطالعه کاریوتیپ هستند.

برای دریافت فایل pdf کلیک کنید.