روش استخراج ماده ژنتیکی(DNA) از کیوی
ساعت ۳:٥۳ ‎ب.ظ روز ۱۳۸٩/٥/٦  کلمات کلیدی: karyotype ، کاریوتیپ ، کیوی

  روش استخراج ماده ژنتیکی(DNA) از کیوی

 


DNA دراکثر سلول‌های تمامی موجودات زنده وجود دارد. این روش کار برای استخراج DNA از میوه کیوی بوده و به عنوان یک مثال ذکر می‌شود. بدیهی است که این روش قابل تعمیم برای استخراج DNA سایر میوه‌ها هم می‌باشد. برای درک بهتر دانشجویان، این آزمایش طوری طراحی شده است که مقدار کافی از DNA کیوی قابل مشاهده با چشم غیرمسلح باشد

 

مواد:

5-10 گرم میوه کیوی

هاون چینی و دسته هاون

اسپاتول یا قاشق آزمایشگاه

لوله آزمایش

نمک طعام

مایع ظرفشویی

آب مقطر

الکل اتانول سرد 95%

الکل اتانول 70%

بن ماری

حمام یخ

طرز تهیه محلول استخراج DNA:

3 گرم نمک‌طعام را در50 میلی‌لیتر آب‌مقطر دیونیزه حل نموده و سپس 10 میلی‌‌لیتر مایع ظرفشویی به آن اضافه می‌کنیم. سپس با اسپاتول مخلوط فوق را هم‌زده و بعد از یکنواخت‌شدن، حجم آنرا به کمک آب‌مقطر دیونیزه به 100 میلی‌لیتر می‌رسانیم.

 

 

روش کار:

1-  5-10 گرم گوشت میوه کیوی را وزن کرده و درون هاون چینی می‌ریزیم.

2-  به کمک دسته هاون گوشت میوه کیوی را له کرده تا به صورت هموژن  (یک دست) درآید.

 

 

3-  10 میلی‌لیتر محلول استخراج DNA به مخلوط هموژن فوق اضافه کرده و آنرا درون لوله آزمایش می‌ریزیم.

4-  لوله آزمایش را به مدت 10 دقیقه در بن ماری 60 درجه سلسیوس(140 درجه فارنهایت) قرار داده و سپس لوله آزمایش را به مدت 10 دقیقه در حمام یخ قرار می‌دهیم.

5-  لوله آزمایش را در دور rpm4000 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ می‌کنیم.

 

 

6-  محلول رویی را به لوله جدید منتقل کرده و هم حجم آن، الکل اتانول95% سرد اضافه می‌کنیم .

7-  لوله آزمایش را درون حمام یخ به مدت 10 دقیقه قرار می‌دهیم .

8-  سه فاز در درون لوله آزمایش تشکیل می‌شود که فاز رویی همان DNA است.

 

 

9-  به کمک یک خلال دندان یا پیپت پاستور، فاز رویی را که حالت ژله ای دارد، خارج نموده و درون لوله آزمایش تمیز قرار می‌دهیم و توسط الکل اتانول 70% آنرا شسته و سپس خشک می‌کنیم.

10-  به محصول نهایی 3 میلی‌لیتر آب مقطر دیونیزه اضافه کرده تا DNA حل شود.

11-  DNA حل شده را در دمای منهای 21 درجه سلسیوس و به مدت یک سال می توان نگهداری کرد و برای نگهداری طولانی مدت DNA، باید آن را در فریزر منهای 70 درجه سلسیوس نگهداری کرد.